在图 2（上）中，人类供体 DRG 组织是利用 AnaBios 专利的手术技术获取的，并通过专人专递，保存在专利的神经停跳液（Neuroplegic Solution）中运送至 AnaBios。随后，在冰冷的神经停跳液中对 DRG 进行解剖，去除所有结缔组织和脂肪。神经节经酶消化处理后，将分离出的神经元进行培养。

细胞被接种在经过 PDL 涂层处理的盖玻片上，并在体外培养（DIV）的前 8 天内进行记录。使用 Axon Instruments 700A 放大器和 Clampex 采样软件记录电流。信号经过 3 kHz 滤波，并以 10 kHz 的频率进行采样。电流通过 P/-4 方案进行漏电流补偿。钠电流是通过从 -80mV 的维持电位给予一个 50 ms 的电压脉冲（至 I-V 曲线峰值）所诱发的。刺激间隔为 10 秒。

电极内液组分（单位 mM）：CsF (135), MgCl₂ (1), Na-ATP (2), EGTA (1), HEPES (10)。电极外液组分（单位 mM）：NaCl (20), Choline-Cl (95), KCl (3), MgCl₂ (1), CaCl₂ (2), CdCl₂ (0.1), NiCl₂ (0.1), 葡萄糖 (25), HEPES (10), TEA (20), TTX (0.0005)。两种受试药物均溶解于 DMSO 中（最终 DMSO 浓度为 0.1%）。

图 3（上）是记录人源 DRG 神经元钙瞬变（钙阶跃，calcium steps）的示意图。该实验中，神经元负载了 Fluo-8 染料并受电场刺激 (EFS) 诱发。通过该方法可以同步测量以“诱发钙阶跃”形式表现的神经兴奋性。通过对比加入抑制剂 A 前后的钙阶跃数量，即可评估化合物抑制剂的药效。

电流钳检测——动作电位发放

分析指标包括：致颤电流 (Rheobase)、静息膜电位、电容，以及在每个化合物浓度和每个刺激频率下的动作电位数量。

斜坡电流钳检测——动作电位发放

分析指标包括：致颤电流 (Rheobase)、静息膜电位、电容，以及在每个化合物浓度下、每次斜坡电流刺激所产生的动作电位数量

电压钳检测——电压门控钠或钾通道

图 2：已知 NaV1.8 阻断剂对人背根神经节神经元中 TTX-R 电流的抑制作用

图3：人源背根神经节神经元钙瞬变记录示意图

图 3：电压刺激

图 4：钙瞬变的激活

用于药物发现的电生理学与钙成像检测

AnaBios 提供电生理学和钙成像检测服务，用于评估化合物对人类背根神经节 (DRG) 兴奋性的影响。我们利用手动膜片钳 (Manual Patch Clamp) 技术记录神经元的动作电位或离子电流。该技术能够精确测量动作电位发放频率、动作电位特征、致颤电流 (Rheobase) 以及静息膜电位。

此外，AnaBios 还提供基于荧光的钙成像服务，用以评估化合物与受体相互作用的影响。通过将钙成像与电场刺激 (EFS) 相结合，我们可以通过测量与动作电位发放相关的钙瞬变 (Calcium Transients)，来评估化合物对神经元兴奋性的影响。

疼痛相关功能检测数据

图 1（下图） 显示了在 0.1Hz、1Hz、3Hz 和 10Hz 的步进频率下, 给予两种钠通道拮抗剂（ Carbamazepine和 PF-05089771）的 10 个神经元所诱发的动作电位数量。

误差棒为标准误 (SEM)。在 0.1Hz 时，神经元受一串 10 个电流脉冲刺激。在 1Hz、3Hz 和 10Hz 时，神经元受一串对应频率的 120 个电流脉冲刺激。结果显示，Carbamazepine) 和 PF-05089771 均以浓度依赖性和频率依赖性的方式抑制动作电位。